Treponema pallidum выявляется с помощью темнопольного или люминисцентного микроскопа в отделяемом твердого шанкра или пунктате лимфоузлов при первичном сифилисе, в отделяемом папулезных элементов при вторичном сифилисе, в пораженных тканях, плаценте, пупочном канатике при врожденном сифилисе. Серологические реакции становятся положительными с 3 недели заболевания. Обязательно одновременно определение антител к ВИЧ, вирусу гепатита В и С.